《植物生理学报》 2009, 45(6): 598-602

富含多糖的芜菁根皮中磷酸化蛋白的Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析技术和质谱鉴定方法

闫海芳¹, 安春鹏¹, 河鳍实之², 李玉花^1,*

1 东北林业大学生命科学学院, 哈尔滨 150040; 2 东京大学大学院农学生命研究科, 日本东京 113-8650

通信作者：李玉花；E-mail: lyhshen@126.com；Tel: 0451-82191783

摘　要：

介绍了利用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析磷酸化蛋白在芜菁根皮中的表达。比较了酚法、SDS法、Tris-HCl法、TCA-丙酮法、裂解液直接裂解法和改良的酚2 h 沉淀法所提取芜菁根皮中总蛋白的浓度和纯度。最后用改良酚法提取了芜菁的总蛋白, 双相电泳分离后, 用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料染色对磷酸化蛋白进行染色分析, 并对磷酸化蛋白点做了质谱鉴定。

关键词：Pro-Q Diamond/SYPRO; 芜菁; 磷酸化蛋白; 质谱鉴定

收稿：2009-03-10   修定：2009-05-05

资助：国家自然科学基金重点项目(30730078)。

Analysis Technique and Mass Spectrometry Method of Phosphoproteome in Swollen Hypocotyls of Turnip (Brassica rapa L. subsp. rapa ‘Tsuda’) Rich in Polysaccharides by Pro-Q Diamond/SYPRO Fluorescence Stain

YAN Hai-Fang¹, AN Chun-Peng¹, KAWABATA Saneyuki², LI Yu-Hua^1,*

¹College of Life Sciences, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China; ²Graduate School of Agricultural and Life Sciences, University of Tokyo, Yayoi, Bunkyo-ku, Tokyo, 113-8657, Japan

Corresponding author: LI Yu-Hua; E-mail: lyhshen@126.com; Tel: 0451-82191783

Abstract:

介绍了利用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析磷酸化蛋白在芜菁根皮中的表达。比较了酚法、SDS法、Tris-HCl法、TCA-丙酮法、裂解液直接裂解法和改良的酚2 h 沉淀法所提取芜菁根皮中总蛋白的浓度和纯度。最后用改良酚法提取了芜菁的总蛋白, 双相电泳分离后, 用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料染色对磷酸化蛋白进行染色分析, 并对磷酸化蛋白点做了质谱鉴定。

Key words: Pro-Q Diamond/SYPRO; 芜菁; 磷酸化蛋白; 质谱鉴定